酵母单杂构建载体(酵母单杂交体系)
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1、酵母单杂筛库只能用质粒吗
因为转进去的两个质粒上具有合成两种氨基酸的基因,所以在两缺板子上能生长。如果两个蛋白能互作,报告基因被激活,所以能在三缺或四缺板子上生长,如果不能互作,就不生长。
同时可以选择提供转化到酵母细胞的文库甘油菌,我们会提供100只转化到酵母细胞的文库甘油菌,可以做100次的文库筛选。
功能如此强大的转录因子,如神龙见首不见尾的大侠,只有在“需要”的时候,偶露峥嵘。构建酵母单杂文库时,即使选择建库材料时遵循了跨时空的原则,能够囊括的转录因子基因依然很少,筛不到靶标转录因子实属正常。
酵母单杂交体系可识别稳定结合于DNA上的蛋白质,可在酵母细胞内研究真核DNA-蛋白质间的相互作用,并通过筛选DNA文库直接获得靶序列相互作用蛋白的编码基因。也可用于分析鉴定细胞中转录调控因子与顺式作用元件相互作用。
并驱动酵母细胞中的报告基因的表达。因此,双杂交系统主要用于发现蛋白质与蛋白质之间相互作用的关系。酵母单杂交系统和双杂交系统的原理和应用范围存在明显的差异,需要根据具体的研究课题选择合适的技术来完成实验。
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