怎样检查载体构建,怎么看载体
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1、...与表达载体 重组子的筛选 诱导表达以及如何检测和纯化表达产物_百度...
一般是通过设计软件,例如oligo6,primer5等,你可以在网上搜一下引物设计软件下载和使用说明,是比较容易的。我一般用DANMAN设计引物,这个软件操作简单,占用资源也小。
用标记基因筛选基因载体的方法很简单,在表达载体上一般有两个甚至两个以上的标记基因,比如,一个是抗青霉素的基因,一个是抗四环素的基因,将目的基因插入到抗四环素的基因中,那这个表达载体就不能表达出抗。
利用报告基因筛选克隆子 (2)根据重组子结构特征的筛选法 1)琼脂糖凝胶电泳比较重组DNA的大小 2)限制性内切酶分析 3)印迹杂交方法 4)PCR法 (3)根据目的基因表达产物采用免疫化学方法筛选。
外源基因转录水平的鉴定 基因表达分为转录及翻译两阶段,转录是以DNA(基因)为模板生成mRNA的过程,翻译是以mRNA为模板生成蛋白质的过程,检测外源基因的表达就是检测特异mRNA及特异蛋白质的生成。
克隆载体:能在宿主细胞中复制繁殖,而且最好要有较高的自主复制能力;容易进入宿主细胞,而且进入效率越高越好;容易从宿主细胞中分离纯化出来, 这才便于重组操作。
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