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1. 如何利用慢病毒载体构建稳定表达外源基因的细胞系不

1、如何利用慢病毒载体构建稳定表达外源基因的细胞系不

构建稳定细胞株有两种主要方式，一种是使用病毒载体介导的基因递送，另一种是利用质粒转染。使用病毒介导的基因递送通常会导致细胞的死亡或转化，因此它不适用于需要形成稳定表达的蛋白质的应用。

一种就是将外源基因先插入到质粒载体中，然后做转化将质粒转化到细菌中，在适宜条件下九可以稳定表达了。质粒一般应用于细菌。不会有性状分离的。

选择宿主细胞系：选择能够稳定承载外源基因的细胞系作为宿主细胞。常用的细胞系包括HEK29CHO、HeLa等。构建表达载体：设计和构建包含目标基因的表达载体。

就是为了不使其进行重组。所以包装蛋白的RNA是不进入包装完成的病毒的。包装出来的病毒也不具备增殖能力。只有结构质粒含有5；LTR和3；LTR，可以重组入宿主细胞基因组，但重组效率不到包装完成后病毒的重组效率的十分之一。

构建方法：先把质粒整合到染色体上后，用相应的质粒DNA中的抗性标志来筛选该细胞系，就行成了稳定表达的细胞株。细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。

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