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1. 大家能否告知sgRNA怎么合成还是转录得到

1、大家能否告知sgRNA怎么合成还是转录得到

有两种方法：1，体外转录sgRNA tracrRNA，然后跟cas9蛋白同转化细菌；2，是构建适合你得菌的敲除质粒，主要是启动子这块需要考虑，但是质粒进去了你得考虑到质粒会一直存在细菌中。

获取方法：①从基因文库中获取；②人工合成（反转录法和化学合成法）；③PCR技术扩增目的基因。

克隆到shRNA表达载体中的shRNA包括两个短反向重复序列，中间由一茎环（loop）序列分隔的，组成发夹结构，由pol Ⅲ启动子控制。随后再连上5-6个T作为RNA聚合酶Ⅲ的转录终止子。

同源重组：通过设计同源重组，可以在果蝇基因组中引入精确的突变。这种方法通常使用转座子或人工设计的同源序列来进行重组。基因编辑技术：近年来，基因编辑技术如CRISPR-Cas9在果蝇突变体的研究中得到了广泛应用。

sgRNA的合成和投递有两种方式：A）PCR；B）单独的sgRNA的表达质粒。A）PCR扩增的方法 U6：来源于人U6小核启动子，常用小RNA 表达，转录本为shRNA。 将sgRNA放到U6后面，利用U6的启动来扩增sgRNA。

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