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1. 1.将之前已经构建好载体的DH5α活化提取质粒2.转化至BL21后筛选 ,请问...

1、1.将之前已经构建好载体的DH5α活化提取质粒2.转化至BL21后筛选 ,请问...

活化就是将冻存的菌液，在对应抗性（视具体质粒而定）的平板上划线，待菌落长起来后挑取单菌落，摇起来后再提质粒。转化是将冻存的BL21感受态融化后插在冰上5-10分钟，然后将5 ul质粒加入感受态细胞，放在冰上20分钟。

从新活化的大肠杆菌（常用DH5a）平板上挑取一个单菌落，接种于3ml LB培养基的试管中，37℃振荡培养过夜。2）将该菌悬液按照1：100转接到液体培养基中，100ml，37℃振荡扩大培养，2~3h。

步骤简述如下：按照下图中1配制溶液，然后65℃处理后加入3中所配制溶液继续后续反应即可。 连接产物的转化 常用的感受态细胞有DH5α、BL21（DE3）、Rossetta等，而抽提质粒一般用DH5α，可以自己制备也可以购买商业化的感受态。

转化的概念及原理在基因克隆技术中，转化特指将质粒DNA或以其为载体构建的重组DNA导入细菌体内，使之获得新的遗传特性的一种方法。它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术之一。

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