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1. 如何以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆人的P53基因?并作最终鉴定。_百度知 ...

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DNA连接：将外源基因片段与质粒进行连接。此步骤需要使用DNA连接酶（如DNA ligase）和连接缓冲液，在适当的条件下将两者连接起来。连接通常是通过共有的限制酶切位点或添加适配体序列实现的。

免疫学筛选法：获得目的基因表达的蛋白抗体，就可以采用免疫学筛选法获得目的基因克隆。这些抗体即可是从生物本身纯化出目的基因表达蛋白抗体，也可从目的基因部分ORF片段克隆在表达载体中获得表达蛋白的抗体。

操作步骤] 操作步骤 通过 PCR 方法获得目的基因：以含目的基因的克隆质粒为模板，按基因 序列设计一对引物（在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点，本实验中为 BamHⅠ和 HiindⅢ） ，PCR 循环获得所需基因片段。

⑥纯化后的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳或紫外分光光度计鉴定 电泳法 ：带负电荷的DNA分子在外加电场的作用下向正极泳动，不同分子量大小与构型的DNA分子泳动速率不同，因此可以在琼脂糖凝胶上呈现不同的条带。

大肠杆菌是原核生物，目的蛋白质基因如果是原核生物的基因：经测序正确后，利用PCR扩增该基因，酶切连接到质粒，转化大肠杆菌筛选阳性克隆，鉴定正确后诱导表达。

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