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1. 如何将p53基因克隆进puc19载体里
2. 载体上的mcs是什么意思
3. pUC19的特点
4. 用pmd-18t载体克隆基因,能用M13测序吗
5. pMD19-T载体 是什么

1、如何将p53基因克隆进puc19载体里

通过同源重组的方法可以将一个或多个DNA片段按照预定方向、快速、高效和精确地插入到线性化载体中，并且最终构建的克隆没有任何额外的碱基序列，因此被称作“无缝克隆”。

方法2：自己构建时，主要将你从人源细胞系中抽提总mRNA，然后反转录。将反转录的总cDNA作为模板，通过PCR 特异的P53引物，克隆出这个基因 然后凝胶电泳分离纯化PCR产物；然后将该PCR产物插入到带有抗性的大肠杆菌质粒中。

从转化板上挑取单个菌落，用2×YTAG（含100 mg/L氨苄青霉素和2% 葡萄糖的2×YT培养液）于30℃培养过夜，以碱裂解法小量提取噬菌粒DNA，以引物A，D进行PCR扩增出ScFv基因片段，并克隆入pUC19载体。

pUC19载体适合于DNA片段的克隆、进行DNA测序、对外源基因进行表达等。

2、载体上的mcs是什么意思

载体MCS就是多克隆位点。分子克隆操作时，载体MCS（多克隆位点）区域中未插入预期DNA片段，这样的载体称为空载体。

载体MCS就是多克隆位点。分子克隆操作时，载体MCS（多克隆位点）区域中未插入预期DNA片段，这样的载体称为空载体。

载体上的mcs指的是分子克隆载体pUC19上的一段DNA序列。MCS是Multiple Cloning Site的缩写，中文译作多重克隆位点。pUC19是一种常用的克隆载体，其MCS区域包含数百个限制性内切酶切割位点，方便进行多次克隆和重组操作。

多克隆位点（英语：multiple cloning site、polycloning site，MCS）又称多重选殖位，也称多位点人工接头（英语：polylinker）简称多接头，是指人工合成的一段DNA序列。

3、pUC19的特点

克隆外源基因。（2）利用lac promoter进行基因表达。（3）使用M13 Primers进行DNA测序。

BL21的基因型为F-，ompT，hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3）。特性不同：DH5a：DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coliDH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。

其特点如下：是染色质外的双链共价闭合环形DNA（covalently closed circular DNA，cccDNA），可自然形成超螺旋结构，不同质粒大小在2-300kb之间，15kb的小质粒比较容易分离纯化，15kb的大质粒则不易提取。

pUC19载体适合于DNA片段的克隆、进行DNA测序、对外源基因进行表达等。

特性不同：DH5a：DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coliDH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。

4、用pmd-18t载体克隆基因,能用M13测序吗

很好用的，只是比国内其他的T载体贵。TAKARA的pMD 18-T Vector有通用的引物M13 和M13-（一般测序公司免费提供的），都可以进行测序的，随便选那个都可以。

用M13R/F，你看看说明书上就有，你自己在确认下，也可以问问测序公司。可以用自己基因片段的引物，也可以用一个通用引物，一个自己目的片段引物。

所以你只能多筛一些克隆，可以用 M13F 你特异基因的F引物 批量做菌落PCR验证（或M13R 特异基因的R），扩出条带就是反向插入了。如果P了上百个克隆还 没有，劝你放弃吧，还是定向克隆吧。

基因组DNA的话有杂带几乎不可避免，因为错配可能很大，挺正常的。如果两条带距离很近、又基本符合你目的片段的大小的话，可以继续跑胶让它们分开一些，然后切胶回收，连接T载体，转化涂板，挑菌测序。

5、pMD19-T载体 是什么

pMD19-T是一种高效克隆PCR产物的专用载体，以pUC19载体为基础构建而成，具有同pUC19载体相同的功能。pCMV-SPORT6是一种真核表达载体。

T-Vector pMD19 （Simple） 是两侧的3’ 端添加了 “T” 的线性化载体，因大部分耐热性DNA聚合酶进行PCR反应时都有在PCR 产物的3’ 末端添加一个 “A” 的特性，所以使用本制品可以大大提高PCR产物的连接、克隆效率。

不是表达载体。pMD18T和pMD19T都是克隆载体，不是表达载体。表达载体取用pET28系列载体吧。

可以。克隆基因最后这几步你是指什么？你将基因连到T载体上，测序验证对了，就行了。接下来构建载体什么的，直接可以用T载体上序列做模版了。

CloneTM一步法快速克隆试剂盒，使得PCR产物不经过酶切与连接，利用同源重组原理直接克隆PCR产物于任意线性化载体中。本产品具有如下特点： 省时：只需要30分钟，即可将PCR产物“同源重组”至目标载体上，直接转化。

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