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1. 酵母双杂交诱饵载体的构建方法?

1、酵母双杂交诱饵载体的构建方法?

将待测基因与Gal4或LexA或其他合适蛋白的DNA结合域融合构建诱饵质粒；将诱饵质粒转化缺乏报告基因启动子的酵母细胞株中，选择被转化的酵母；再将文库质粒转化到酵母中；通过报告基因的功能筛选相互作用的蛋白。

构建酵母双杂交载体 首先需要构建酵母双杂交载体，该载体包含两个重要的部分：一个携带蛋白质结构域的DNA结合域和一个携带转录激活域的DNA结合域。

具体实验步骤如下：构建酵母表达载体：将含有自身复制元件2μ、酵母转录起始序列、选择性筛选的标记基因等元件的酵母表达载体与感兴趣的蛋白质基因融合，在表达载体中得到融合基因。

一般采用膜检的方法，检测LacZ 基因的表达情况。膜检方法如下：1） 将阳性克隆菌落影印于滤纸上。2） 将滤纸完全浸于液氮中，时间长于30 秒，取出后晾干。

最近在做龙须菜高温胁迫表达cDNA文库的构建，选择的是CaM做诱饵质粒构建表达载体pGBKT-CaM，利用SMART技术将重组质粒转化到酵母菌Y187中，搜集了部分资料找到了一份比较全的酵母双杂交实验操作步骤。

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