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1. 请教载体构建的问题!

1、请教载体构建的问题!

选择合适的载体：要根据不同的实验需求选择不同的载体，比如选择质粒、病毒、合成RNA等。选择载体需要考虑载体大小、复制能力、选择标记、特异性表达等因素。

PCR是否成功？如果跑胶后目的片段的条带位置正确，可基本确定成功。胶回收是否成功？胶回收后是否跑胶查看浓度？SmaI酶切体系是否正确？通常酶量不能超过体系1/10，否则甘油会妨碍酶切的进行。

切割质粒和目的基因的限制酶必须是同-.种酶，以获得相同的黏性末端，利于重组质粒的构建。插入的目的基因只是结构基因部分，其表达需要调控序列，因而用作载体的质粒的插入部位前须有启动子，后须有终止子。

载体构建目的 ①用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去。②利用他在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制（称为克隆）。理想的运载体是质粒（plasmid），在基因工程中，常用人工构建的质粒作为载体。

第一个问题，只有一个碱基缺失，克隆测序和引物合成都没有问题；第二个问题：酶切连接入载体后，克隆过程就完成了；第三个问题：如果你说的是转化过程的话，应该是先做好连接，再做转化。

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