本篇文章给大家谈谈构建载体37度连接，以及构建载体为什么一直不成功对应的知识点，希望对各位有所帮助，不要忘了收藏本站喔。 今天给各位分享构建载体37度连接的知识，其中也会对构建载体为什么一直不成功进行解释，如果能碰巧解决你现在面临的问题，别忘了关注本站，现在开始吧！

1. 37℃ T载体能连接吗

1、37℃ T载体能连接吗

PCR产物纯化后测定DNA的浓度，按照适当的比例与T-Vector在含有连接酶的buffer中4°过夜或37°3小时连接，然后连接产物涂筛选平板（ALB）筛选即可。

通过T载体连接，我们可以方便地将目的DNA片段插入到载体中，构建出符合实验需求的重组DNA分子。

这样，pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT配对，在连接酶的催化下，就可以把PCR产物连接到pUCm-T载体中，形成含有目的片断的重组载体。连接反应的温度在37℃时有利于连接酶的活性。

一是TA连接，如phusion，高保真的taq，PCR后会有一个A末端，和T载体的T末端互补相连。另一是平末端连接，如pfu，PCR后是平末端，可以和blunt II vector这一类的载体直接相连，但顺序是随机的，可能是正的，也可能是反的。

室温5分钟。根据查询基因克隆实验显示，在室内温度下连t载体可以连接5分钟。阳性克隆筛选方式：有通过蓝白斑筛选的T载体，也有在载体携带的自杀基因多克隆位点中插入目的基因后只生长阳性克隆的零背景载体。

到此，以上就是小编对于构建载体37度连接的问题就介绍到这了，希望介绍关于构建载体37度连接的1点解答对大家有用。