大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于构建载体失败原因分析的问题，于是小编就整理了1个相关介绍构建载体失败原因分析的解答，让我们一起看看吧。

1. ...您我构建PET32a表达载体,但是没有办法表达,求原因

1、...您我构建PET32a表达载体,但是没有办法表达,求原因

首先得判断蛋白条带是否正确，因为32a表达过程中，会在目标蛋白上加上部分自己序列，所以电泳图谱中你所要表达的蛋白，应该比你自己预期的大20-30kDa。

总的来说有两方面的原因，一个是表达载体的问题，另一个是表达受体的问题。载体可能出现的问题是发生突变或者被修饰导致启动子缺失或者位置发生改变。受体方面，受体的突变也可能导致无法表达。

你每一步都要做阳性对照啊，否则你说没有问题怎么可信呢，说不定是你操作的问题呢，酶切时候的阳性对照做了没有，连接的阳性对照做了没有，还有你片段多大，是否毒性蛋白，都有影响的。

当构建完成后携带有信号肽的时候，一些蛋白在真核表达体系中表达量极低。去除信号肽序列值后，直接表达成熟肽，表达水平明显提高。所以说构建的真核表达载体高表达mRNA却检测不到目的蛋白是完全有可能的。

不过影响不影响目的蛋白功能就不一定了。我个人倒是觉得，如果不做定位的的话，gus检测不是那么重要。可以把gus切下去（选用sacI位点）。pcr在基因组合转录组里面都能检测出来就认为目的基因正确表达了。

到此，以上就是小编对于构建载体失败原因分析的问题就介绍到这了，希望介绍关于构建载体失败原因分析的1点解答对大家有用。