目的基因构建到相关载体-目的基因构建到相关载体上
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1、目的基因重组表达载体的构建及在原核中的表达
目的基因重组表达载体的构建及在原核中的表达是生物技术领域的重要研究内容。目的基因重组表达载体的构建是将目的基因与适当的调控序列(如启动子、转录终止信号序列等)和标记基因连接在一起,形成重组表达载体。
例如,如果我们想研究代谢途径,可以选择参与该途径的多个关键酶编码基因进行串联重组。 选择载体:在选择载体时,需要考虑载体的类型、大小、复制起始位点、选择标记和启动子等元素。常用的原核表达载体包括质粒和噬菌体。
用EcoRI和KpnI分别酶切重组T质粒和原核表达载体pGENKS,然后resistin基因片段和表达载体通过T4DNA连接酶进行定向连接,用核酸内切酶EcoRI、KpnI酶切和测序方法鉴定出重组表达质粒。
载体构建目的 ①用它作为运载工具,将目的基因转移到宿主细胞中去。②利用他在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制(称为克隆)。理想的运载体是质粒(plasmid),在基因工程中,常用人工构建的质粒作为载体。
题目为原核系统,如受体细胞是细菌,一般是将细菌用氯化钙处理,以增大细菌细胞壁的通透性,使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。
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