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构建载体和纯载体(构建载体目的)

构建载体和纯载体(构建载体目的)

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  1. 载体构建的基本流程

1、载体构建的基本流程

①用它作为运载工具,将目的基因转移到宿主细胞中去。②利用他在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制(称为克隆)。理想的运载体是质粒(plasmid),在基因工程中,常用人工构建的质粒作为载体。

将构建好的诱饵载体导入到酵母细胞中。常见的方法包括化学法、电穿孔法或减压法等。筛选:将转化后的酵母细胞进行筛选,一般使用选择培养基含有适当选择标记的培养基。仅表达诱饵蛋白的酵母细胞可以用于下一步实验。

基因表达载体的构建过程:目的基因的获取 (1)目的基因是指: 编码蛋白质的结构基因。(2)获取方法:①从基因文库中获取;②人工合成(反转录法和化学合成法);③PCR技术扩增目的基因。

载体构建 一.原理 依赖于限制性核酸内切酶,DNA连接酶和其他修饰酶的作用,分别对目的基因和载体 DNA进行适当切割和修饰后,将二者连接在一起,再导入宿主细胞,实现目的基因在宿主细胞内的正确表达。

将回收的片段与你已经酶切好的表达载体的片段连接。(15)再转化至大肠杆菌扩增。(16)PCR检菌,酶切检菌。(17)检菌正确,则你的表达载体构建完成。

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