分子构建需要克隆载体吗(...构建文库时和作基因表达时应如何选择分子克隆载体和宿主菌细胞_百度...)
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1、...构建文库时和作基因表达时应如何选择分子克隆载体和宿主菌细胞_百度...
载体一般选用大肠杆菌的质粒(小型环状DNA)或者噬菌体,植物用烟草花叶病毒。载体的要求是要有切割位点结合位点,复制起点和标记基因的位点。然后根据宿主的特性选用不同的载体。
选择合适的载体:要根据不同的实验需求选择不同的载体,比如选择质粒、病毒、合成RNA等。选择载体需要考虑载体大小、复制能力、选择标记、特异性表达等因素。
普通型载体 1) 特点: 至少有一个以上的克隆位点和两个标记基因,其中一 个用于转化体选择,另一个用于重组子检测。2) 用途: 基因组或cDNA文库的构建;次克隆(subcloning)或限制酶谱分析;外源DNA扩增。
载体的选择:基因克隆常用的载体有:质粒载体、噬菌体载体、柯斯质粒载体、单链DNA噬菌体载体、噬粒载体及酵母人工染色体等。从总体上讲,根据载体的使用目的,载体可以分为克隆载体、表达载体、测序载体、穿梭载体等。
④容易从宿主细胞中分离纯化出来, 这才便于重组操作。⑤有容易被识别筛选的标志,当其进入宿主细胞、或携带着外来的核酸序列进入宿主细胞都能容易被辨认和分离出来。
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