大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于构建基因表达载体简单步骤的问题，于是小编就整理了1个相关介绍构建基因表达载体简单步骤的解答，让我们一起看看吧。

1. [实用技巧] 构建基因过表达载体之设计引物详细步骤

1、[实用技巧] 构建基因过表达载体之设计引物详细步骤

植物转基因载体和这些酶都是非常常用的试剂。载体构建好之后需要把它们导入大肠杆菌中复制，这里就要用到大肠杆菌的感受态了，十把构建好的载体和感受态混合，然后放到42度热水处理个1分钟，再冰上放个3分钟。

再设计下游引物：因下游3’端有连续22个A，若算入，则Tm值和GC含量均不达标。因此，在引物设计时，去掉尾部部分A序列，输入尾部序列，点击“反向互补序列”，插入XbaI位点，得到TTTTTGTTTGACTTTGTGTTTATTTTTAAT，Tm=50℃。

如果以质粒作为运载体， 首先要用一定的限制酶切割质粒，使质粒出现一个缺口，露出黏性末端。然后用同 一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端（部分限制性内切酶可切割出平末端，拥有相同效果）。

使用pEGFP-N1载体，选择F-Hind Ⅲ和R-Kpn Ⅰ作为酶切位点，确保与mRNA的起始和终止密码子相匹配，如图略所示。DNAstar的MegAlin工具帮助我们确定CDS区的ATG（179）和TGA（879）位置。

到此，以上就是小编对于构建基因表达载体简单步骤的问题就介绍到这了，希望介绍关于构建基因表达载体简单步骤的1点解答对大家有用。