构建敲除突变载体和转化子(突变载体构建原理)
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1、cDNA能构建基因敲除载体吗
cDNA 文库是指某生物某发育时期所转录的全部 mRNA 经反转录形成的 cDNA 片段与某种载体连接而形成的克隆的集合。
从而引起两个LoxP之间DNA序列的缺失.如果将Cre重组酶cDNA通过基因工程的手段置于组织或细胞特异性启动子之下,可以得到Cre组织/细胞特异性表达的Cre小鼠,也叫Cre工具小鼠.跟Flox小鼠交配之后,可以得到条件性基因敲除小鼠。
提取转基因小鼠的RNA,以反转录后的cDNA为模板进行基因A的PCR。对照实验:提取非转基因(野生型)小鼠的RNA,以反转录后的cDNA为模板进行基因A的PCR。
.pBlueScriptII的提取1.取1ul商品的pBlueScriptII,转化入大肠杆菌宿主菌中,取5ul转化产物均匀涂布在含AMP的LB平板上,37℃培养过夜。
植物转基因载体和这些酶都是非常常用的试剂。载体构建好之后需要把它们导入大肠杆菌中复制,这里就要用到大肠杆菌的感受态了,十把构建好的载体和感受态混合,然后放到42度热水处理个1分钟,再冰上放个3分钟。
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