大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于载体构建时加a连t目的是的问题，于是小编就整理了3个相关介绍载体构建时加a连t目的是的解答，让我们一起看看吧。

1. DNA切胶回收,两端加A是什么意思,有什么作用?
2. 构建重组质粒之前为什么先连接t载体
3. 简述TA连接的原理及其中PCR产物3撇端带A的原因

1、DNA切胶回收,两端加A是什么意思,有什么作用?

■ 制品说明TaKaRa DNA A-Tailing Kit 是在平滑末端DNA片段的3′末端添加一个“A”尾的试剂盒，使用本制品可以使平滑末端的DNA片段进行TA克隆成为可能。

Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能，PCR反应时在每条PCR扩增产物的3`端自动添加一个3`-A突出端。只有用经过特殊处理的具有3’-T突出末端的DNA片断才能通过T/A配对进行连接。

加完a尾以后不用胶回收。加完a尾的产物可直接用于连接反应，不用再次清洁或者胶回收纯化。

博凌科为-为你解PCR产物在48小时内其两端的A不会有显著损失。如果时间过长，如半月后建议重新做扩增。若在两周内，可以大胆尝试，只要片段不是很长，一般为3000bp。若时间过于长久，可以选择平末端载体进行克隆。

胶回收的目的是得到比较纯的目的基因的条带，以便可以更好地进行下一步实验。

2、构建重组质粒之前为什么先连接t载体

先连接T载体是为了提高转化效率一般来说市面上出售的T载体都进行了优化，容易连接片段（也就是效率较高），因此构建表达载体时有时会先连接T载体。同时T载体的测序引物比较明确（商业化的缘故），因此测序也方便一些。

T载体是一种克隆载体，链接后先得到较多的拷贝，可以提高链接表达载体的效率。

所以可以加一步，先和T载体连接，测序结果如果正确，然后再做shuttle，连接到目的载体上，因为T载体很好连，所以有时候在目的载体连不上的时候可以使用T载体。

为了更方便的对DNA进行克隆，后续又将克隆的载体进行了简化，出现了T载体，这样就可以不用酶切，直接将片段连接到载体上，以便于DNA的保存及后续扩增。以TA克隆为例来介绍整个连接过程。

这样，pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT配对，在连接酶的催化下，就可以把PCR产物连接到pUCm-T载体中，形成含有目的片断的重组载体。连接反应的温度在37℃时有利于连接酶的活性。

3、简述TA连接的原理及其中PCR产物3撇端带A的原因

TA克隆方法（OriginalTACloningKit）把PCR片断与一个具有3‘-T突出的载体DNA连接起来的方法。因为PCR反应中所使用的聚合酶具有末端转移的活性，通常在3；加上A。

T克隆的原理是基于常规PCR反应中所使用Taq聚合酶能够在PCR产物的3‘末端非特异性添加一个A，这样实际上常规PCR产物都含有3端突出一个A的粘性末端。

那是用的Taq酶，Taq酶可以在pcr产物的3；末端加上1个A。做TA克隆的时候，用Taq酶在pcr产物末端加上一个A，（DNA是双链，自然两端各有一个A），T载体已经切开，切口两端都有一个T，然后TA配对，连接。

PCR纯化产物直接连接通常分为两种情况，一是TA连接，如phusion，高保真的taq，PCR后会有一个A末端，和T载体的T末端互补相连。

目的片段的5‘和3’端，都自带或者通过加A，带上polyA尾巴。和T载体上的polyT连接成环状。

到此，以上就是小编对于载体构建时加a连t目的是的问题就介绍到这了，希望介绍关于载体构建时加a连t目的是的3点解答对大家有用。