大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于构建的载体总是自连怎么办的问题，于是小编就整理了1个相关介绍构建的载体总是自连怎么办的解答，让我们一起看看吧。

1. 如何避免载体自连现象

1、如何避免载体自连现象

单酶切要想防止自连，最好的办法是把载体酶切产物脱磷酸。脱了磷酸的载体就无法自连，它只能和目的片段连接。如果不想脱磷，可以在连接反应体系中加大目的片段的数量，提高阳性克隆的比例，但这不能完全避免自连。

端的磷酸基团对于DNA连接是必须的，用碱性磷酸酶处理切开的载体后，载体不能在DNA连接酶的作用下自连，而目的基因片段两端是有5；端的磷酸基团的，可以在DNA连接酶的作用下与载体连接。所以碱性磷酸酶处理可以防止质粒载体DNA自连的作用。

载体自连最容易发生的情况有两种，一种是单酶切，一种是平末端连接。这两种情况下，通常为了防止载体自连会对酶切后的载体使用碱性磷酸酶处理，将DNA 5‘端的－P基团置换成-OH，这样会一定程度的防止载体自连。

双酶切。在基因两端分别用不同的内切酶来酶切，载体上也用这两种酶来酶切。这样自己的酶切位点只能识别自己的位点，就不会发生基因方向的错误了。而且载体的两个位点互相不识别，也不会自连接。

因为5撇磷酸的存在，才能和另一个片段的3-OH发生缩合脱水反应，也就是自连作用 碱性磷酸酶可以去除DNA断裂处的5撇端的磷酸基团。

到此，以上就是小编对于构建的载体总是自连怎么办的问题就介绍到这了，希望介绍关于构建的载体总是自连怎么办的1点解答对大家有用。