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载体构建中点突变(中间载体和最终载体)

载体构建中点突变(中间载体和最终载体)

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  1. 构建编码区点突变基因序列及表达载体实验全过程

1、构建编码区点突变基因序列及表达载体实验全过程

接下来,我们将探索构建一个野生型TNF-α真核表达载体的详细过程。构建TNF-α的遗传密码首先,从生物数据库下载TNF-α的完整序列,锁定编码区(CDS),如图5-8所示,这是实验的起始点。

当拿到一个基因的DNA片段后,就需要把它导入一个载体,一方面长期保存。另一方面也需要以载体为媒介将基因导入受体细胞中。基因表达载体的构建是基因工程的核心。常用的载体有细菌质粒,噬菌体和动植物病毒。其中质粒载体最常用。

定点突变实验注意事项 引物设计时须参照引物设计原则,注意引物中的GC含量,引物长度等,可在引物的两端选择G或者C,可以提高引物和模板结合的概率。

在构建基因表达载体时要用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶。基因表达载体的构建(即目的基因与运载体结合)是实施基因工程的第二步,也是基因工程的核心。

将特定的外源基因构建在植物表达载体中并转入受体植物,并不是植物遗传转化的最终目的。理想的转基因植物往往需要外源基因在特定部位和特定时间内高水平表达,产生人们期望的表型性状。

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