大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于构建原核表达载体需要加a吗的问题，于是小编就整理了3个相关介绍构建原核表达载体需要加a吗的解答，让我们一起看看吧。

1. 用高保真酶pcr,连到表达载体上还要不要加a
2. 基因表达载体的构建所需的条件
3. 原核表达的起始片段必须是atg吗

1、用高保真酶pcr,连到表达载体上还要不要加a

博凌科为-为你解如果你是直接从DNA中克隆基因的话，设计一对引物，用高保真的Phusion或者Vent酶就可以。NEB的产品很不错。 如果你要从cDNA中克隆的话，考虑到RNA的降解，你不能使用一对引物来克隆。

我觉得，有可能是含有普通taq酶的。3‘-5’外切活性是产生高保真性的保证。35外切可以纠错，切除错配碱基保证pcr的高保证性。

直接加，切胶回收浓缩后加。 直接加0.5ul Taq，70度，10min即可，虽然这种方法效率较低，但是简单，快速。

PCR纯化产物直接连接通常分为两种情况，一是TA连接，如phusion，高保真的taq，PCR后会有一个A末端，和T载体的T末端互补相连。

你好，pEASY载体是个平端载体。将你的PCR产物直接连上就行。不需要酶连的过程。克隆载体都是这样的。这个很容易做。涂个板子就行了。隔天挑克隆，测序验证即可。你说的T4连接酶是要连到表达载体上。

2、基因表达载体的构建所需的条件

作为一个基因表达载体，必须要满足以下条件：细菌的复制起始位点Ori；用来对转入质粒的细菌进行筛选的抗性基因比如：Kan Amp spec 等抗性筛选基因。

构建条件：必须能够在宿主细胞中复制，使重组基因能够在宿主基因中复制，从而稳定保存下来，这是作为运载体的必须条件。具有多个限制酶切点，从而可以使不同的粘性末端与之相连，增强实用性。

必须能够在宿主细胞中复制，使重组基因能够在宿主基因中复制，从而稳定保存下来，这是作为运载体的必须条件。

所有的载体都需具备三个条件：一个复制子、一个选择性标志和一个克隆位点。复制子是含有DNA复制起始位点的一段DNA，也包括表达由载体编码的复制必需的RNA和蛋白质的基因。选择性标志对于质粒在细胞内持续存在时必不可少的。

3、原核表达的起始片段必须是atg吗

这要看你的要求了，如果不是N融合表达，载体上有没有起始密码子，你就得加了，TAA也是一样，case by case。

这是进化的结果。据推测，当初有各种不同起始密码的生物，但最终活下来的只有ATG这一种。线粒体等通过类似共生的方法逃过一劫，但已不能独立存在了。

、基因编码区（CDS）和终止子（terminator）。CDS区需要起始密码子ATG和终止密码子TAA。如果是原核表达，还需要操纵区lac I（用于IPTG诱导）和RBS（核糖体结合位点）区。一般都有一个多克隆位点MCS，用于基因的插入。

少数细菌（属于原核生物）以GUG（缬氨酸）或UUG为起始密码。 最近研究发现线粒体和叶绿体使用的遗传密码稍有差异，比如线粒体和叶绿体以AUG、AUU、AUA 为起始密码子。

起始密码有好多种 ，不是所有的 基因 都是以AUG 开始的 NCBI 上有的，很全面。

到此，以上就是小编对于构建原核表达载体需要加a吗的问题就介绍到这了，希望介绍关于构建原核表达载体需要加a吗的3点解答对大家有用。