载体构建应用有哪些类型-载体构建的原理及方法
大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于载体构建应用有哪些类型的问题,于是小编就整理了1个相关介绍载体构建应用有哪些类型的解答,让我们一起看看吧。
1、有关大肠杆菌质粒载体的构建策略包括哪些
提取质粒,做酶切。酶切的体系要看你所用的酶。(13)酶切后还是需要进行回收。(14)将回收的片段与你已经酶切好的表达载体的片段连接。(15)再转化至大肠杆菌扩增。(16)PCR检菌,酶切检菌。
目的基因是以生物基因组DNA为模板,设计引物,PCR出来的。目的产物的序列正确后,就可以构建重组载体。主要方法就是酶切目的产物,连接目标载体,转化大肠杆菌感受态,最后鉴定一下单克隆是不是阳性克隆就OK了。
拷贝数低、单一酶切位点少、遗传标记不理想等缺陷,不能满足克隆载体的要求,因此往往需要以多种野生型质粒为基础进行人工构建。目前实验室使用的大肠杆菌质粒大多是由少数几个野生型质粒构建的。
通过PCR扩增目标DNA片段,并将其克隆到质粒载体中。利用限制性内切酶对质粒进行线性化,然后将目标DNA片段连接到线性化的质粒上。将质粒转染至大肠杆菌等宿主细胞中,利用细菌自身复制机制扩增质粒。
由此可见,内含子对基因表达的作用机制可能是很复杂的,如何利用内含子构建高效植物表达载体,目前还缺乏一个固定的模式,值得进一步探讨。 7 多基因策略迄今为止,多数的遗传转化研究都是将单一的外源基因转入受体植物。
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