本篇文章给大家谈谈构建基因表达载体课题设计，以及基因工程中构建基因表达载体的目的对应的知识点，希望对各位有所帮助，不要忘了收藏本站喔。 今天给各位分享构建基因表达载体课题设计的知识，其中也会对基因工程中构建基因表达载体的目的进行解释，如果能碰巧解决你现在面临的问题，别忘了关注本站，现在开始吧！

1. [实用技巧] 构建基因过表达载体之设计引物详细步骤

1、[实用技巧] 构建基因过表达载体之设计引物详细步骤

植物转基因载体和这些酶都是非常常用的试剂。载体构建好之后需要把它们导入大肠杆菌中复制，这里就要用到大肠杆菌的感受态了，十把构建好的载体和感受态混合，然后放到42度热水处理个1分钟，再冰上放个3分钟。

再设计下游引物：因下游3’端有连续22个A，若算入，则Tm值和GC含量均不达标。因此，在引物设计时，去掉尾部部分A序列，输入尾部序列，点击“反向互补序列”，插入XbaI位点，得到TTTTTGTTTGACTTTGTGTTTATTTTTAAT，Tm=50℃。

如果以质粒作为运载体， 首先要用一定的限制酶切割质粒，使质粒出现一个缺口，露出黏性末端。然后用同 一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端（部分限制性内切酶可切割出平末端，拥有相同效果）。

使用pEGFP-N1载体，选择F-Hind Ⅲ和R-Kpn Ⅰ作为酶切位点，确保与mRNA的起始和终止密码子相匹配，如图略所示。DNAstar的MegAlin工具帮助我们确定CDS区的ATG（179）和TGA（879）位置。

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