本篇文章给大家谈谈mirna的构建载体，以及mirna的结构特点对应的知识点，希望对各位有所帮助，不要忘了收藏本站喔。 今天给各位分享mirna的构建载体的知识，其中也会对mirna的结构特点进行解释，如果能碰巧解决你现在面临的问题，别忘了关注本站，现在开始吧！

1. 构建miRNA荧光素酶报告基因载体

1、构建miRNA荧光素酶报告基因载体

将目的基因3’UTR区域或者lncRNA序列构建至载体中报告基因Luciferase的后面，构建荧光素酶质粒。

pGL3-basic是检测启动子的荧光报告载体，当然是将miR的启动子序列构建上去。内切酶按照你基因和多克隆位点的序列来选择。

有三种形式的载体构建方式：以pri-miRNA形式构建，以pre-miRNA形式构建，以mature-miRNA形式构建。其中以pre-miRNA形式构建的方法应用最早也最广泛。

验证microRNA同lncRNA靶向互作。将待测lncRNA序列插入报告基因载体的3’UTR区域，检测荧光素酶活性。启动子结构分析。将启动子区域（约2k左右）进行分段截短或突变，构建入报告基因载体，检测荧光素酶活性。

miRNA与靶基因的互作实验验证方法主要包括以下几种：双荧光素酶报告基因系统：该方法通过构建含有miRNA靶标位点的Luciferase报告基因载体，并将其转染至细胞中，然后共转染miRNA和Luciferase报告基因载体。

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