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1. t载体连接原理

1、t载体连接原理

T载体连接原理是基于DNA连接酶的作用，将目的DNA片段与T载体进行连接，形成重组DNA分子的过程。详细来说，T载体是一种特殊设计的线性DNA分子，其末端带有一个突出的单链T（胸腺嘧啶）碱基。

连接反应通常将两个不同大小的片断相连。很多DNA聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA每条链的3’端加上一个突出的碱基A。pUCm-T载体是一种已经线性化的载体，载体每条链的3’端带有一个突出的T。

TA连接的原理就是： 扩出来带A的PCR片段与商品化的T载体进行连接。T 载体就是只有一个T核苷酸突出碱基的载体（目前T载体都已经商品化，只需购买就行了），这样单个T和单个A 就很容易连接在一起，就可以做转化验证了。

腺苷酸可和T-载体的3胸腺嘧啶 互补，T-载体系统进行有效连接的基础正是这种碱基配对作用。相反，有校正活性的聚合酶将移去这个3 突出端，产生平端PCR产物，这种产物不能直接用T-载体系统进行克隆。

我做过几个克隆，没用过T载体，直接将酶切后纯化的产物进行连接，照样可以连接成功，基本上都会有10-50个克隆长出来。我用的是Sal I和Nde I这两个酶切位点，似乎这两个都是平端的哦。

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