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1. 慢病毒载体的构建讲解

1、慢病毒载体的构建讲解

慢病毒载体的构建背景知识病毒载体是一种常使用于分子生物学的工具，可将遗传物质带入细胞，原理是利用病毒具有传送其基因组进入其他细胞，进行感染的分子机制。可发生于完整活体（invivo）或是细胞培养（invitro）中。可应用于基础研究、基因疗法或疫苗。

要进行shRNA载体构建，首先需要根据自己的基因，设计出对应的 靶点 、 loop序列 ， 酶切位点序列 ，详见 LncRNA的shRNA慢病毒载体引物设计 - 引物先用10000g在4°离心2min，再按照说明书的要求，加入DEPC或者无酶ddH2O将寡核苷酸稀释为100 μM。

构建绿色荧光蛋白（GFP）标记的干涉缺氧诱导因子（HIF）-2α表达的慢病毒载体，并对所得产物进行鉴定。

原代细胞较难转染，可以先构建慢病毒，再用慢病毒进行转染。将actin基因，放入慢病毒融合表达载体，与荧光蛋白（GFP）融合表达，注意避免移码突变。然后将重组质粒以及辅助质粒共转染细胞，可以用脂质体法，慢病毒配套细胞一般为293。收集慢病毒，浓缩。用慢病毒转染原代细胞。做好先做预实验。

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