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构建重组载体常用的工具酶(构建重组载体时,如何选择酶切位点)

构建重组载体常用的工具酶(构建重组载体时,如何选择酶切位点)

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  1. 重组dna技术中常用的工具酶

1、重组dna技术中常用的工具酶

重组DNA技术中,常用的工具酶有:限制性核酸内切酶、DNA连接酶、反转录酶、DNA聚合酶I、多聚核苷酸激酶、末端转移酶、碱性磷酸酶等。DNA解链酶在DNA复制过程中起作用。

限制性核酸内切酶是重组DNA技术中常用的工具酶,所谓限制性核酸内切酶就是识别DNA的特异序列,并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类工具酶。限制性核酸内切酶存在于细菌体内,对细菌遗传性状的稳定遗传具有重要意义。目前已发现有1800种以上,根据酶的组成、所需因子及裂解DNA方式的不同可分为三类。

限制性核酸内切酶、DNA连接酶等工具酶。限制性核酸内切酶(RestrictionEndonucleases):酶能够识别特定的DNA序列,在该序列上切割DNA分子。起到了“剪刀”的作用,可以产生特定的片段。DNA连接酶(DNALigases):酶能够将两个断裂的DNA片段连接起来。

限制性内切酶、DNA连接酶和DNA聚合酶。限制性内切酶用于识别特异序列,切割DNA。DNA连接酶用于跟限制性内切酶对着干,催化DNA中相邻核苷酸间形成磷酸二酯键,使DNA切口缝合,连接DNA片段。DNA聚合酶用于DNA复制,连接两条DNA单链形成一条DNA双链,作用于碱基对间的氢键。

DNA重组技术中对核酸的“精雕细刻”主要用酶作为工具。分子生物学研究过程中发现的酶,许多都用作工具,表列出最常用的几种工具酶。限制性核酸内切酶(restriction endonuclease)在重组DNA技术中有重要地位,在此较详细介绍。

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