大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于plko载体构建的问题，于是小编就整理了1个相关介绍plko载体构建的解答，让我们一起看看吧。

1. shRNA实验步骤

1、shRNA实验步骤

要进行shRNA载体构建，首先需要根据自己的基因，设计出对应的 靶点 、 loop序列 ， 酶切位点序列 ，详见 LncRNA的shRNA慢病毒载体引物设计 - 引物先用10000g在4°离心2min，再按照说明书的要求，加入DEPC或者无酶ddH2O将寡核苷酸稀释为100 μM。

设计具有两端反向重复序列的片段，插入表达载体内即可。目前有构建shRNA的试剂盒出售的。

先用iso-type control，也就是非特异性的同型抗体染的细胞测，设好了阴性的阈值。 再用特异性抗体测用对照序列shRNA转染的细胞，看阳性细胞的比率 再测用shRNA转染的实验组的细胞，看阳性细胞的比率。 最后对比2和3的阳性细胞的比率有无变化。如果有明显减低，说明shRNA有效。

方法：RT-qPCR和Western blot测定胶质瘤细胞Hs68U251中MAP2的基因和蛋白表达。构建shRNA MAP2质粒，转染胶质瘤细胞，筛选出MAP2低表达的胶质瘤细胞，并经Western blot验证。

rna的选择：需要根据研究对象的需要，选择适合的RNA探针（如siRNA、shRNA、miRNA、lncRNA等）。rna标记：为了方便后续检测和定位RNA分子，可以使用荧光标记、生物素标记或其他标记化方法对RNA分子进行标记化处理。

到此，以上就是小编对于plko载体构建的问题就介绍到这了，希望介绍关于plko载体构建的1点解答对大家有用。