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1. 同源重组法构建载体原理

1、同源重组法构建载体原理

其中 T5 核酸外切酶具有 5’3’核酸外切酶的活性，能够将序列从 5’3’开始降解，此时暴露出载体以及片段的3’同源序列，经过碱基互补配对，DNA 聚合酶添加缺失碱基后由 DNA 连接酶将片段与载体进行连接，从而达到载体重组的功能。因此，如果不添加同源序列，载体与片段、片段与片段之间将无法进行连接。

同源重组构建质粒原理依赖于限制性核酸内切酶，DNA连接酶和其他修饰酶的作用，分别对目的基因和载体DNA进行适当切割和修饰后，将二者连接在一起，再导入宿主细胞，实现目的基因在宿主细胞内的正确表达。该方法已经成为分子生物学研究和基因工程中不可或缺的技术手段。

纯干货：同源重组构建载体——PCR扩增基础入门 PCR，即聚合酶链式反应，是一种生物技术的瑰宝，它犹如DNA世界的放大镜，能在体外复制特定的DNA片段，实现基因的高效扩增。其核心原理是利用DNA聚合酶在特定温度控制下，从单链DNA模板合成互补链，从而实现序列的大量复制。

重组法，利用同源重组将外源基因整合到表达载体，外源基因可以先联到一个含重组位点的中间载体，然后用重组酶将其置换到表达载体，转化到感受态细胞，筛选出阳性克隆。拓展介绍 过表达载体主要是将目的基因的编码区（CDS）构建到相应的质粒或者病毒载体中，达到在目的基因过量表达的作用。

选择合适的质粒载体：首先需要选择合适的质粒载体，考虑到外源基因的大小、表达强度和选择标记等因素。质粒是一种环状的DNA分子，可以在细胞内自主复制和表达外源基因，因此选择合适的质粒载体是进行同源重组构建质粒的第一步也是非常重要额一步。

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