大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于双酶切载体构建的问题，于是小编就整理了1个相关介绍双酶切载体构建的解答，让我们一起看看吧。

1. 构建重组表达质粒前,还需要将空表达载体和重组克隆质粒进行双酶切...

1、构建重组表达质粒前,还需要将空表达载体和重组克隆质粒进行双酶切...

双酶切就是为了验证是否有目的基因，如果双酶切条带正确，而且PCR也没有问题，就可以确定质粒构建成功。质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA片段（10kb）且结构简单，质粒要比其它任何载体都要好。

重组质粒是把载体质粒酶切开，连接上PCR片段，然后转化感受态细胞，培养后提质粒获得的，这一系列过程中都无法检测目的基因是否连接成功了，是否转化成功了，只有对转化后的菌再次提质粒、酶切检测或PCR检测才能确定前边的步骤是否成功。测序是更准确的方法，一般不用而已。

\验证重组质粒的构建是否成功，如果成功了，电泳应该是载体片断和插入序列两条条带，分别对应应有的长度。

重组质粒的构建步骤相信很多小伙伴还不知道，现在让我们一起来看看吧！目的基因是以生物基因组DNA为模板，设计引物，PCR出来的。目的产物的序列正确后，就可以构建重组载体。主要方法就是酶切目的产物，连接目标载体，转化大肠杆菌感受态，最后鉴定一下单克隆是不是阳性克隆就OK了。

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