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1. 纯干货:目的基因PCR扩增——构载体第一步

1、纯干货:目的基因PCR扩增——构载体第一步

纯干货：同源重组构建载体——PCR扩增基础入门 PCR，即聚合酶链式反应，是一种生物技术的瑰宝，它犹如DNA世界的放大镜，能在体外复制特定的DNA片段，实现基因的高效扩增。其核心原理是利用DNA聚合酶在特定温度控制下，从单链DNA模板合成互补链，从而实现序列的大量复制。

载体构建的基本流程主要包括目的基因的获取、载体的选择和准备、目的基因与载体的连接、重组子的筛选与鉴定以及重组载体的扩增和纯化等步骤。首先，要进行目的基因的获取。这是载体构建的第一步，也是最关键的一步。可以通过PCR扩增、基因文库筛选、化学合成等方法获取目的基因。

有两种常用的方法。第一种是直接将PCR扩增的基因片段酶切，然后连接到酶切过的表达载体上。第二种是先把PCR产物连到过度载体上，再从过度载体抢切下目的基因，最后再连接到酶切过的表达载体上。

第一步：目的基因的获取 目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因 。原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_。

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