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载体构建测序引物,psin载体测序引物

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  1. 构建的载体测序为什么不用基因的特异性引物而是用载体的通用引物?

1、构建的载体测序为什么不用基因的特异性引物而是用载体的通用引物?

通用引物,含义为克隆位点两旁的序列匹配,目的是引扩出DNA片段,主要用来测序。而序列特异性引物指一种测定基因突变的方法。通用引物是一般和载体多克隆位点两旁的序列匹配,或者是与载体里面的一些启动、终止元件匹配。这样不管载体插入什么DNA片段,都可以用通用引物扩出来。

使用通用引物可以进一步证明平板上生长的转化菌含有目的质粒,而不是污染了其他菌,也可以从某种程度上证明我们转化的质粒没有被污染。而使用目的片段引物虽然能检测到目的片段,但不能证明检测到的目的片段连在相应的质粒上面。

引物和目的基因是对应的,但引物的特异性是受到多种因素影响的。所以现在有primer premier等软件专门用来设计引物,因为引物的特异性受到反应条件、模板的影响。当模板就只有目的基因时引物是非常特异的,扩增出目的基因。

听你描述,是扩增到同家族的其它基因了吧?就是引物不特异,有非特异性扩增了呗。你确定切胶回收的条带大小没错吗?如果条带大小没法区分特异和非特异条带,你要么干脆重新设计引物做巢式PCR;要么继续挑更多的克隆、送更多的样品测序,用身为土豪的霸气和欧洲人的RP,找到混在其中的特异产物。

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