载体构建容易吗(载体构建有几种方法)
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1、无缝克隆,让载体构建变得像搭积木一样简单
在构建多顺反子表达载体时,无缝克隆更是展现出其独特魅力。通过PCR拆分大质粒并引入P2A元件,无缝克隆简化了整个构建过程,使得繁琐的酶切操作成为历史。使用像NEBuilder HiFi DNA Assembly这样的专业工具,线性化质粒和设计引物变得轻而易举。然而,如同所有技术一样,无缝克隆并非完美无瑕。
无缝克隆,让载体构建变得像搭积木一样简单 吴思涵 知识星球「生物狗窝」,生物医学同行交流社区 前言 提起“克隆”、“载体构建”这两个词,似乎总会同时提到“限制性内切酶”。没错,在过去数十年,用限制性内切酶产生黏性末端,并通过碱基互补配对,连接两个甚至更多片段的克隆方法,是载体构建的经典方案。
无缝克隆技术的基本原理是利用PCR技术(聚合酶链式反应)在体外扩增目标序列,并加入诸如限制酶等基因工具,将扩增后的DNA片段粘接到载体上,构建达到需要的目的序列。DNA合成的方法多种多样,可以是全合成法,也可以是利用模板合成法。这些方法都是基于DNA分子互补碱基配对原理而进行的。
ClonExpress技术是一种简单、快速并且高效的 DNA 无缝克隆技术,可将插入片段定向克隆至任意载体的任意位点。 ClonExpressII 是新一代重组克隆试剂盒,包含增强的重组酶 ExnaseII。
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