大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于怎么用pet28a构建载体的问题，于是小编就整理了4个相关介绍怎么用pet28a构建载体的解答，让我们一起看看吧。

1. pET28 载体如何设计插入片段?是否需要对读码框?
2. pet28a做表达载体,蛋白就是不表达,求助
3. pet28a 目的基因需要启动子吗
4. 如何用pET30a 构建载体

1、pET28 载体如何设计插入片段?是否需要对读码框?

因此，真核基因本身的mRNA前端部分不能直接使用，需要进行一定的修饰。

生物计算机的原理是信息以波的形式传播，当波沿着蛋白质分子链传播时，会引起蛋白质分子链中单键、双键结构顺序的变化，开始计算。其主要原材料是生物工程技术产生的蛋白质分子，并以此作为生物芯片。

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每一段双螺旋区至少需要4～6对碱基对才能保持稳定。在不同的RNA中，双螺旋区所占比例不同。【RNA的二级结构】细胞内有三类主要的核糖核酸，即：mRNA、rRNA、tRNA。它们各有特点。在大多数细胞中RNA的含量比DNA多5～8倍。

2、pet28a做表达载体,蛋白就是不表达,求助

可能是太弱你看不出来，建议用His抗体做个western 看看是不是有条带而看不出。2 是不是融解性太差，建议将你的氨基酸序列做个疏水性分析。

首先分析测序结果是否正确，融合表达有没有同框，其次分析是没有表达还是表达较弱，可以采用Western检测目标蛋白或者检测标签，如果是弱表达的话就需要优化表达条件。

首先确定载体序列是否正确，启示子、终止子、读码框等。其次确定操作步骤是否正确。最后将这三段基因序列用慢病毒包装后在肝癌细胞中过表达后提蛋白做WB即可。

先测序看看序列是不是三的倍数，保证是连接到载体上，并且载体也是转入表达菌的，不行的话，通常做法是调节诱导剂浓度，诱导时间，不行就换载体，如BL21换ROSSETTA等，再不行就换载体。

3、pet28a 目的基因需要启动子吗

pET28a载体的目的基因启动子是T7-lac 类型，其后目的基因的表达需要T7RNA聚合酶，在不加IPTG时，不会大量表达T7 RNA聚合酶的同时，阻遏物也会结合于lac启动子上，从而尽可能减少目的基因本底表达。

pET28载体具有T7噬菌体的启动子和终止子，因此不需要额外添加启动子，除非你做多启动子。你的ATG前可具有若干碱基，也可以没有，并且可以不符合读码框。

从标签之前的启动子算起，直接算到pet-28a上的终止子为止。计算分子量的方法：三个碱基对应一个蛋白质，每个蛋白质的分子量平均为110Da。我认为你的目的蛋白的分子量很可能是380/3*0.11 3=17kD左右。

需要，作为运载体需要具备的条件就是含有启动子，标记基因，终止子，目的基因插入运载体后，细胞翻译蛋白质是利用运载体本身的启动子，终止子。如果不去掉就法翻译完全。而且，目的基因本身就不包含终止子。

4、如何用pET30a 构建载体

需要，作为运载体需要具备的条件就是含有启动子，标记基因，终止子，目的基因插入运载体后，细胞翻译蛋白质是利用运载体本身的启动子，终止子。如果不去掉就法翻译完全。而且，目的基因本身就不包含终止子。

以前合过相应的引物，是针对pET30a的，5；端用的是BamH1，3；端用的是Xho1 现在要更换载体用pET28a。要插入的基因长度是684bp。

我最后重做了，重新设计引物，重新TA克隆和连接表达载体了，很快呀，就一个周，就出来了。做不出来你可以一边找原因，一边重做。

如果没有弄错，那就需要改动连接体系，载体和片段的数量比在1：5-1：10之间，片段越小就多加点。还有一个就是感受态效率，做连接的感受态效率要在10^6以上。

到此，以上就是小编对于怎么用pet28a构建载体的问题就介绍到这了，希望介绍关于怎么用pet28a构建载体的4点解答对大家有用。