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1. 两个基因融合构建真核表达载体需要去掉信号肽吗?

1、两个基因融合构建真核表达载体需要去掉信号肽吗?

可以，不包括自身信号肽。载体信号肽或基因信号肽，很多都是分泌性表达时起到分泌作用的信号肽，你只需要保留一个信号肽就可以了。我建议你保留载体上面的信号肽。目的基因的功能主要是编码基因区的氨基酸序列来实现的，有他们在就可以保证基因表达蛋白功能的正常了。

信号肽一般都是用来穿膜定位用的，如果你只是为了表达获得这个蛋白，而不需要把该蛋白定位到他应该在的细胞器上的话，建议把信号肽切掉。

这个标签很小的，一般不需要切去，对实验没什么影响。但一定要切去的话，可以用凝血酶切除，切除方法参照酶的说明书，切去后在再做一次蛋白纯化。

原核表达是边转录边表达的，没有区域间隔。信号肽大多是疏水性的，溶解性较差，所以在原核中的表达会有些困难。另外原核生物本身的基因中是不存在什么信号肽片段的，信号肽序列中的密码子对原核生物来说可能是稀有密码子。

有的时候在不同的表达体系里面对蛋白的表达量是有影响的。当构建完成后携带有信号肽的时候，一些蛋白在真核表达体系中表达量极低。去除信号肽序列值后，直接表达成熟肽，表达水平明显提高。所以说构建的真核表达载体高表达mRNA却检测不到目的蛋白是完全有可能的。

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