构建rnai载体的引物(rna引物的主要作用)
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1、RNAi 的机制及操作基本程序是怎样的?
rnai技术的基本程序主要为:确定干扰靶点、合成siRNA、转染siRNA到细胞中。确定干扰靶点:通过基因组学凳厅袜、转录组学等手段,确定需要干扰的靶基因或RNA。合成siRNA:根据确定的干扰靶点,利用化学合成方法制备相应的siRNA。
RNAi是有dsRNA参与指导的,以外源和内源mRNA为降解目标的转基因沉默现象。具有核苷酸序列特异性的自我防御机制,是一种当外源基因导入或病毒入侵后,细胞中与转基因或入侵病毒RNA同源的基因发生共同基因沉默的现象。
当导入与目的基因编码区序列相同的双链RNA时,Dicer酶会将此双链RNA切割成21-23bp的短片段(称为siRNA),siRNA与多种蛋白质结合形成RNA诱导沉默复合体(RISC),此时其中的siRNA解旋形成单链RNA。
目前, RNAi的作用机制主要是在线虫、果蝇和拟南芥等生物体内阐明的。生物体由于RNA病毒入侵、转座子转录、基因组中反向重复序列(inverted repeats)转录及外源基因导入等原因,细胞中可出现dsRNA分子。当各种原因产生的dsRNA在细胞中出现时,细胞中组特定蛋白复合物可识别dsRNA。
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