大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于载体构建菌长的少的问题，于是小编就整理了1个相关介绍载体构建菌长的少的解答，让我们一起看看吧。

1. 为什么构建载体时,转化过后不长菌?

1、为什么构建载体时,转化过后不长菌?

最常见的可能原因如下：（1）目的片段有问题，末尾没有加A；（2）连接有问题，没有连接成功；（3）转化有问题，如感受态质量，抗生素浓度等。

基因载体分离误差。敲除电转化后不长菌的是由于在构建载体时，转化的流程存在错误，基因和载体分离不标准导致，可以重新实验，确保基因和载体切开，用氯化钙法制备提升转化效率。

如果没有弄错，那就需要改动连接体系，载体和片段的数量比在1：5-1：10之间，片段越小就多加点。还有一个就是感受态效率，做连接的感受态效率要在10^6以上。当然，你想想操作过程当中有没有错误，有时候涂板的耙子温度太高了，菌液离酒精灯太近了，都会烫死细菌的。

第一个不是问题，PCR保温就是为了保护DNA不被破坏。第二个是问题，和我以前遇到的情况很相似，我做的是RbCl2的EPI300感受态，当时没放冰水混合物冰浴，直接丢到-20C冰箱，结果结冰，导致转化率大幅下降。

载体自连是常见的现象。载体自连后在非重组缺陷的菌株中往往会发生重组或缺失现象，这会导致你这样的现象。污染的外源DNA片段。比如PCR产物中模板、非特异扩增产物等。3 感受态细胞或转化时、或涂布平板时污染了其他带有相同抗性的其他质粒的大肠杆菌。这在实验室也是常见的。

到此，以上就是小编对于载体构建菌长的少的问题就介绍到这了，希望介绍关于载体构建菌长的少的1点解答对大家有用。