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载体构建的sirna-载体构建的意义

载体构建的sirna-载体构建的意义

大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于载体构建的sirna的问题,于是小编就整理了1个相关介绍载体构建的sirna的解答,让我们一起看看吧。

  1. 构建植物siRNA有哪些表达载体?

1、构建植物siRNA有哪些表达载体?

体内转录:最近有几个研究小组构建了一些可以在真核细胞内表达siRNA的载体,包括被广泛应用的质粒载体和新研发的转染效率较高的病毒载体。

磷酸钙共沉淀;电穿孔法;DEAE-葡聚糖和polybrene;机械法;阳离子脂质体试剂。

siRNA表达框架:siRNA表达框架(siRNA:expression:cassettes,SECs)是一种由PCR得到的siRNA表达模版,包括一个RNA:polⅢ启动子,一段发夹结构siRNA,一个RNA:polⅢ终止位点,能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。

原代细胞较难转染,可以先构建慢病毒,再用慢病毒进行转染。 将actin基因,放入慢病毒融合表达载体,与荧光蛋白(GFP)融合表达,注意避免移码突变。 然后将重组质粒以及辅助质粒共转染细胞,可以用脂质体法,慢病毒配套细胞一般为293。

②以烟草花叶病毒基因组为靶位,设计合成表达小干扰RNA(siRNA)寡聚核苷酸,亚克隆到植物双元表达载体Pbi121中,农杆菌瞬时表达,确定了TMV复制酶基因、外壳蛋白基因和运输蛋白基因的siRNA对TMV侵染的干扰作用和基因沉默机理。

到此,以上就是小编对于载体构建的sirna的问题就介绍到这了,希望介绍关于载体构建的sirna的1点解答对大家有用。

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