载体构建实验反思-载体的构建与转化实验
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1、如何构建载体
②利用他在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制(称为克隆)。理想的运载体是质粒(plasmid),在基因工程中,常用人工构建的质粒作为载体。
设计载体:确定需要删除结构域的载体,并选择合适的表达系统和标记。获得原始载体:从商业来源或其他实验室中获取所需的原始载体,这可能是一个普通的质粒或已经包含某些结构域的质粒。构建酶切位点:根据需要删除的结构域,在原始载体上设计引物,包括要添加到质粒的限制酶切位点。
在PCR完成后,产物的检测至关重要,通过1%琼脂糖凝胶电泳,可以清晰看到扩增产物的绿色条带,通过这种方法确定PCR成功。在点样和电泳过程中,技巧性地操作移液枪,如平稳、缓慢地插入,确保样品无气泡,是保证电泳效果的关键。
用来构建载体的是一般是一些病毒的环形基因,用限制性核酸内切酶分别对该环形基因和目的基因进行切割,将切好的目的基因和环形基因通过DNA连接酶进行连接构成一个完整的基因,这个基因就是带有其他基因的重组基因。
原理步骤如下:载体构建的原理:载体构建是指将外源DNA片段导入到特定的载体中,以便将其传递到目标细胞中。常用的载体是质粒,其具有自主复制和传递的能力。质粒由多个功能区域组成,包括起始子、选择性标记基因、多克隆位点等,区域可以用于插入和操作外源DNA。
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