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1. 酵母双杂交筛库,mating完成后,涂至四缺板上,挑单克隆阳性菌落用双缺摇...

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因为转进去的两个质粒上具有合成两种氨基酸的基因，所以在两缺板子上能生长。如果两个蛋白能互作，报告基因被激活，所以能在三缺或四缺板子上生长，如果不能互作，就不生长。

而且，酵母细胞的转化效率比细菌要低约4个数量级。因此转化步骤就成为双杂交技术的瓶颈。Bendixen等人通过酵母接合型的引用，避免了两次转化操作，同时又提高了双杂交的效率。

目前我们已经成功完成数千个不用样本的文库构建，主要客户为中国科学院上海植物生理生态研究所、上海交通大学、浙江大学、浙江省农科院、山东省农科院等多家单位完成酵母双（单）杂交文库构建服务，物种包括人、小鼠、大鼠、水稻、拟南芥、牡丹、稻飞虱、苹果、油菜、小麦、贝壳、葡萄、真菌等。

我遇到过这样的情况，有可能你用的agar含有微量的营养，因此4缺并不是真正意义上的4缺了，换用bacto agar就可以了 还有可能是组氨酸渗透，代谢补偿途径。另外，按说嘌呤是最严格的限制因素，但是我的酵母不加嘌呤勉强还可以活，因为接种上去的培养基里有很微量的各种营养。

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