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1. 在基因表达构建载体中什么切割质粒什么切割目的基因,为什么?

1、在基因表达构建载体中什么切割质粒什么切割目的基因,为什么?

质粒是一个闭合的DNA圆圈，你得先切开它，把它切成一条线；然后你再从一长串DNA上切下你要的目的片段，用连接酶像胶水一样，吧质粒的两端和目的片段的两端连接起来——又成一个圆圈了，但是这次这个DNA圆圈已经含有你要的片段了。由于载体质粒只有圆圈状才有活性，才有用，所以你必须这么做。。

切割目的基因和质粒，最终目的是让这两者能够经DNA连接酶链接成为完整的表达载体。目的基因的切割：①选取的限制酶，其识别序列不可出现在目的基因内部，否则会破坏目的基因。②为了避免目的基因自身环化（目的基因的两端被连接成环），一般切割目的基因时选取目的基因两侧产生不同末端的限制酶。

“用不同的限制酶切割目的基因和质粒”应理解为“用不同的限制酶切割目的基因，用不同的限制酶切割质粒”。比如用限制酶1和限制酶2切割目的基因，用限制酶1和限制酶2切割载体，“不同”就体现在“限制酶1和限制2”。

用两种酶是为了得到链状的目的基因，一般是不用一种酶的，比如一种限制性内切酶可以得到 ---TA 的末端，因为DNA是双链，那么目的DNA的两端就可以形成互补（这里由于版面的关系我就不表示出来了，你自己简单的画个示意图就明白），产生一个环状的DNA分子，就很难用于研究了。

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