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1. 构建基因表达载体必须的工具酶是

1、构建基因表达载体必须的工具酶是

基因表达载体时要用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶。过程：首先要用一定的限制酶切割质粒，使质粒出现一个缺口，露出黏性末端。然后用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端（部分限制性内切酶可切割出平末端，拥有相同效果）。

【解析】：（1）将基因表达载体导入小鼠的受精卵中常用显微注射法，构建基因表达载体常用的工具酶是限制性内切酶和DNA连接酶。农杆菌的作用是将目的基因导入到植物（受体）细胞内。

大致需要以下几种东西：（1）原始表达载体，用以把目的基因连上去；（2）扩增目的基因的模板；（3）核酸内切酶，用于切割载体和目的基因；（4）连接酶，用于连接目的基因和载体；（5）大肠杆菌感受态，用于转化筛选阳性克隆。

一般构建载体用T4连接酶。有的构建载体不是用连接的方式，而是用同源抓捕，这样的话是不需要用到酶的。但是载体构建出来是环状的，如果将其直接转染进入细胞的话，会随机断裂，然后插入细胞的基因组，这样的话有可能会在目的基因上断裂。因此，在转染之前，会将载体线性化，即在特定位点切开。

CIP（碱性磷酸酶，去磷酸化，防止质粒自连）载体：对于细菌来说（质粒）： 复制载体： pUC18， pUC1..对应使用的宿主如 Top10 表达载体：pACYC， pET 系列的质粒，对应表达宿主如BL21 对于动物和植物来说也可以用质粒来做载体，但转化方法不太一样，比如植物需要农杆菌转化法细菌用热激或电转。

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