为什么构建人工染色体载体,为什么构建人工染色体载体的原理
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1、酵母人工染色体的YAC载体的工作原理
这个人工染色体在转化进入酵母细胞后,能够像自然染色体一样复制,并在细胞分裂时分配到子细胞中,实现了大片段DNA的克隆。携带外源DNA片段的重组子会导致sup4抑制基因失活,形成红色菌落;而载体自连的克隆在酵母细胞中形成白色菌落。这些红色菌落,每个都携带了不同的外源DNA片段,共同构成了YAC文库。
YAC载体主要是用来构建大片段DNA文库,特别用来构建高等真核生物的基因组文库,并不用作常规的基因克隆。link:xlinkhref=i011301图4-13link、4-14描绘了YAC载体的结构和操作的工作流程。
人工染色体载体(artificial chromosome vector):利用染色体的复制元件来驱动外源DNA片段复制的载体。n实际上是一种“穿梭”克隆载体,含有质粒克隆载体所必备的第一受体(大肠杆菌)质粒复制起始位点(ori),还含有第二受体(如酵母菌)染色体DNA着丝点、端粒和复制起始位点的序列,以及合适的选择标记基因。
YAC克隆不容易与酵母自身染色体相分离。应用领域在染色体区带构建YAC重叠群,可以促进大规模基因组测序和致病基因的克隆。 细菌人工染色体(BAC)是以细菌F因子为基础构建的细菌克隆载体。BAC克隆容量可以达300,可以通过电穿孔导入细菌细胞。特点拷贝数低,稳定,比YAC易分离。
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