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载体构建的协议包括(载体构建的原理及方法)

载体构建的协议包括(载体构建的原理及方法)

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  1. 载体构建的基本流程

1、载体构建的基本流程

①用它作为运载工具,将目的基因转移到宿主细胞中去。②利用他在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制(称为克隆)。理想的运载体是质粒(plasmid),在基因工程中,常用人工构建的质粒作为载体。

在点样和电泳过程中,技巧性地操作移液枪,如平稳、缓慢地插入,确保样品无气泡,是保证电泳效果的关键。最后,观察电泳结果并思考引物设计对构建载体的影响,这将有助于深化对PCR的理解和应用。同源重组构建载体是一个复杂的过程,PCR只是其中的第一步。熟练掌握PCR技术,为后续的基因操作打下坚实基础。

载体构建 一.原理 依赖于限制性核酸内切酶,DNA连接酶和其他修饰酶的作用,分别对目的基因和载体 DNA进行适当切割和修饰后,将二者连接在一起,再导入宿主细胞,实现目的基因在宿主细胞内的正确表达。

第一节 植物基因工程载体种类 根据其功能和构建过程,可分为以下种类。 (1)目的基因克隆载体:其功能是保存和克隆目的基因。与 微生物基因工程相似,通常是由多拷贝的E. Coli小质粒为载 体。 (2)中间克隆载体:是构建中间表达载体的基础质粒。

根据你已知的序列设计带有酶切位点的引物。(2)PCR,跑胶,看看你的目的条带大小对不。(3)条带对的话再重新跑个大孔胶,然后切胶回收。(具体步骤根据你们所用试剂盒上的说明书进行),切胶回收后还需电泳,看你回收后怎么样。

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