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1. 融合蛋白表达载体如何构建

1、融合蛋白表达载体如何构建

在生物技术的日益发展中，标签融合蛋白纯化技术因其高效性和便捷性得到了广泛应用。要实现这一目标，关键在于构建合适的原核表达载体。首先，我们需要理解蛋白表达系统的基本构成，包括启动子、调控序列和载体等元素。商业载体针对不同宿主如大肠杆菌或哺乳动物细胞进行了优化，通常配备有便于筛选的抗性标记。

可以通过化学方法连接，也可通过基因的融合来实现。在基因操作中，对一些分子数小的多肽基因常采用融合的方法与某一基因（如lac）相连，二者之间接上某一酶（如凝血酶）的切口，以增加在体内表达后产物的稳定性，也有的故意使两个分子串连融合以提高疗效，如IL-3与GM-CSF。

选择表达宿主系统：根据需要表达的蛋白的性质和规模，选择适合的表达宿主系统。常用的表达宿主系统包括大肠杆菌E. coli、酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞等。获得目标基因：获得目标基因序列，可以通过化学合成、PCR扩增、文库筛选等手段获得。构建表达载体：设计和构建表达载体，将目标基因插入表达载体中。

构建表达载体首先取决于你的实验目的，例如你的实验是否要求你的蛋白表达出来必须可溶性蛋白，载体上面的标签决定了你的纯化方法，当然也决定了实验成本，等等一系列需求。 拿带标签的载体为例，因为带标签后可以增加蛋白质的可溶性，也为纯化带来了方便，一般都会采用。

载体构建目的 ①用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去。②利用他在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制（称为克隆）。理想的运载体是质粒（plasmid），在基因工程中，常用人工构建的质粒作为载体。

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