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1. 基因表达载体的构建所需的条件

1、基因表达载体的构建所需的条件

【答案】：（1）能够独立的复制；（2）具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记，以利于外源基因的克隆、鉴定和 筛选；（3）应具有很强的启动子，能为大肠杆菌的RAN聚合酶所识别；（4）应具有阻遏子 （5）应具有很强的终止子 （6）所产生的mRNA必须具有翻译的起始信号。

必须能够在宿主细胞中复制，使重组基因能够在宿主基因中复制，从而稳定保存下来，这是作为运载体的必须条件。具有多个限制酶切点，从而可以使不同的粘性末端与之相连，增强实用性 拥有标记基因是为了方便质粒进入宿主细胞后容易被检测出来，以便检测目的基因是否导入受体。

拷贝数高分子量较小、具有选择标记、具有复制起始点。首先，能在细菌中稳定存在，有较高的拷贝数，具有选择标记的每一个标记基因都含有单一的酶切位点。其次，在复制时，需在特定的位点起始，具有特定核苷酸排列顺序的片段，即复制起始点。

便于进行筛选。如大肠杆菌的pBR322质粒携带氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，就可以作为筛选的标记基因。一般来说，天然运载体往往不能满足上述要求，因此需要根据不同的目的和需要，对运载体进行人工改建。当前所使用的质粒载体几乎都是经过改建的。载体DNA分子大小应合适，以便操作。

基因表达载体是用来将外源基因导入宿主细胞并表达的一种DNA分子，它的构建过程需要遵循以下原则： 选择合适的载体：要根据不同的实验需求选择不同的载体，比如选择质粒、病毒、合成RNA等。选择载体需要考虑载体大小、复制能力、选择标记、特异性表达等因素。

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