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载体构建中转化(载体转运示意图)

载体构建中转化(载体转运示意图)

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  1. 为什么构建载体时,转化过后不长菌?

1、为什么构建载体时,转化过后不长菌?

基因载体分离误差。敲除电转化后不长菌的是由于在构建载体时,转化的流程存在错误,基因和载体分离不标准导致,可以重新实验,确保基因和载体切开,用氯化钙法制备提升转化效率。

最常见的可能原因如下:(1)目的片段有问题,末尾没有加A;(2)连接有问题,没有连接成功;(3)转化有问题,如感受态质量,抗生素浓度等。

如果没有弄错,那就需要改动连接体系,载体和片段的数量比在1:5-1:10之间,片段越小就多加点。还有一个就是感受态效率,做连接的感受态效率要在10^6以上。当然,你想想操作过程当中有没有错误,有时候涂板的耙子温度太高了,菌液离酒精灯太近了,都会烫死细菌的。

载体自连是常见的现象。载体自连后在非重组缺陷的菌株中往往会发生重组或缺失现象,这会导致你这样的现象。污染的外源DNA片段。比如PCR产物中模板、非特异扩增产物等。3 感受态细胞或转化时、或涂布平板时污染了其他带有相同抗性的其他质粒的大肠杆菌。这在实验室也是常见的。

yinleidawn(站内联系TA)不会啊,我转过好几次,培养基也没有问题,因为没有转化的菌可以生长啊。

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