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1. 同源重组法构建载体原理

1、同源重组法构建载体原理

同源重组反应严格依赖DNA分子之间的同源性，100%重组的DNA分子之间的重组常见于非姐妹染色体之间的同源重组，称为Homologous Recombination，而小于100%同源性的DNA分子之间或分子之内的重组，则被称为Hemologus Recombination。

其中 T5 核酸外切酶具有 5’3’核酸外切酶的活性，能够将序列从 5’3’开始降解，此时暴露出载体以及片段的3’同源序列，经过碱基互补配对，DNA 聚合酶添加缺失碱基后由 DNA 连接酶将片段与载体进行连接，从而达到载体重组的功能。因此，如果不添加同源序列，载体与片段、片段与片段之间将无法进行连接。

同源重组构建质粒原理依赖于限制性核酸内切酶，DNA连接酶和其他修饰酶的作用，分别对目的基因和载体DNA进行适当切割和修饰后，将二者连接在一起，再导入宿主细胞，实现目的基因在宿主细胞内的正确表达。该方法已经成为分子生物学研究和基因工程中不可或缺的技术手段。

纯干货：同源重组构建载体——PCR扩增基础入门 PCR，即聚合酶链式反应，是一种生物技术的瑰宝，它犹如DNA世界的放大镜，能在体外复制特定的DNA片段，实现基因的高效扩增。其核心原理是利用DNA聚合酶在特定温度控制下，从单链DNA模板合成互补链，从而实现序列的大量复制。

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