构建载体的引物设计,构建载体如何设计引物
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1、[实用技巧] 构建基因过表达载体之设计引物详细步骤
现在我们就需要把SUN片段连到一个载体,用VectorNTI打开,研究一下用哪个酶处理,这个载体需要用Sma1这个酶切开,然后用SUN连上,替换切下来的ccdb,这里要用到两个酶,一个Sma1限制性内切酶切开,一个DNA连接酶把新片段连上,植物转基因载体和这些酶都是非常常用的试剂。
基因表达载体的构建(即目的基因与运载体结合)是实施基因工程的第二步,也是基因工程的核心。 将目的基因与运载体结合的过程,实际上是不同来源的DNA重新组合的过程。如果以质粒作为运载体, 首先要用一定的限制酶切割质粒,使质粒出现一个缺口,露出黏性末端。
接下来,我们将探索构建一个野生型TNF-α真核表达载体的详细过程。构建TNF-α的遗传密码首先,从生物数据库下载TNF-α的完整序列,锁定编码区(CDS),如图5-8所示,这是实验的起始点。
如果t载体上没有表达载体上需要的酶切位点,就要重新设计带酶切位点的引物,PCR扩增t载体后酶切并连表达载体。如果t载体上有需要的酶切位点,直接酶切后回收目的片段,连接表达载体即可。
载体构建目的 ①用它作为运载工具,将目的基因转移到宿主细胞中去。②利用他在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制(称为克隆)。理想的运载体是质粒(plasmid),在基因工程中,常用人工构建的质粒作为载体。
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