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sgrna的构建用什么载体(构建shrna载体)

sgrna的构建用什么载体(构建shrna载体)

大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于sgrna的构建用什么载体的问题,于是小编就整理了1个相关介绍sgrna的构建用什么载体的解答,让我们一起看看吧。

  1. sgRNA设计

1、sgRNA设计

SgRNA设计方法SgRNA(smallguideRNA简称),是CRISPR基因敲除敲入系统中重要的组成部分,早先发现的guideRNA,由两部分组成—tracRNA和crRNA,两部分融合表达后,即sgRNA也能很好的行使guide的功能,与cas9蛋白结合,引导cas9酶靶向基因组DNA进行剪切。

打开网站 http://crispr.mit.edu ,将基因名称,邮箱,第二外显子序列输入到对话框,点击 Agree and submit,等待网站设计成对的 sgRNA 序列。一般推荐网站设计,因为网站可以预测脱靶位点数,避免基因脱靶产生。当然也可以手动选择特异的 sgRNA 序列。设计成对的 sgRNA 序列。

如何设计高效的植物sgRNA进行基因编辑 目的基因的获取 (1)目的基因是指: 编码蛋白质的结构基因。(2)获取方法:①从基因文库中获取;②人工合成(反转录法和化学合成法);③PCR技术扩增目的基因。

首先,设计sgRNA犹如寻找基因的黄金钥匙,要求我们选取包含内含子和外显子的互补序列。创新可能受到限制,但可以通过参考已有的成功构建但未使用的序列,以提高效率。crispor.tefor.net这样的在线工具为我们提供了便利,只需输入目标物种和合适的PAM结构,系统会筛选出高评分的候选序列。

sgrna是single guide RNA(单导向RNA)的缩写。在CRISPR/Cas9系统中sgRNA与gRNA是一个概念。

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