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载体构建的流程图(载体构建的基本流程图)

载体构建的流程图(载体构建的基本流程图)

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  1. 如何构建载体

1、如何构建载体

②利用他在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制(称为克隆)。理想的运载体是质粒(plasmid),在基因工程中,常用人工构建的质粒作为载体。

用来构建载体的是一般是一些病毒的环形基因,用限制性核酸内切酶分别对该环形基因和目的基因进行切割,将切好的目的基因和环形基因通过DNA连接酶进行连接构成一个完整的基因,这个基因就是带有其他基因的重组基因。

首先要用一定的限制酶切割质粒,使质粒出现一个缺口,露出黏性末端。用同一种限制酶切断目的基因,使其产生相同的黏性末端。将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处,首先碱基互补配对结合,两个黏性末端吻合在一起,碱基之间形成氢键。

“酶切-连接”方法是通常构建RNA干扰载体最常用的方法,被广泛应用于各种生物之中。其构建过程是:通过PCR方法得到目的基因的片段(添加了合适的酶切位点),使之正反相连形成顺式片段和反式片段。

首先,要进行目的基因的获取。这是载体构建的第一步,也是最关键的一步。可以通过PCR扩增、基因文库筛选、化学合成等方法获取目的基因。其中,PCR技术是最常用的方法,可以快速、特异地扩增目的基因。

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